石蠟切片和冰凍切片的區（qū）別

石蠟切片

組織（zhī）學常規製片技術中（zhōng）***為廣泛應用的（de）方法。石蠟切（qiē）片不僅用於觀（guān）察正常細胞組織的形態結構，也是病理學和法醫學等學科用以研究（jiū）、觀（guān）察及判（pàn）斷細胞組織的形態變化的主要方法，而且（qiě）也已相當廣泛地用於其他許（xǔ）多學科（kē）領域的研究中。

金屬質（zhì）感分割線

1、 固定：將新鮮組織切成（chéng）小塊，固（gù）定於（yú）4%多聚（jù）甲醛過夜。凝固組（zǔ）織中的物質（zhì）成分，盡可能保持其活體時的結構。同時能使組織硬（yìng）化（huà），有利於切（qiē）片的進行。

2、脫水：為了減少組織材料的急劇收縮，應使用（yòng）從低（dī）濃（nóng）度到高濃度遞（dì）增的順序進行經70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每次時間為1小時。固定後的組織材料需除去留在組織內的固定液（yè）及其結晶沉澱，否則會影響後（hòu）期的染色效果。

3、透明（míng）：常用的透明劑（jì）有二甲苯，二甲苯是石蠟的溶劑。純酒精不能（néng）與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶（róng）的溶劑，替換出組織內的酒精。材料塊在透明劑浸（jìn）漬過程稱透明。

4、浸（jìn）蠟：先把組織（zhī）材料塊放在熔化的石蠟（là）和二甲苯的等量混合（hé）液（yè）浸漬1小時。

先後移入2個熔化的（de）石（shí）蠟液中浸（jìn）漬1小時左右。

5、包埋：以少許熱蠟液將其（qí）底部迅速（sù）貼附於包（bāo）埋盒內上，然（rán）後（hòu）置於速凍（dòng）台，讓石蠟固定。

6、切片：切片刀的銳利（lì）與否、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質量，可將蠟塊至於冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為3-5um，用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片（piàn）。

7、貼片與烤片：一般使用恒溫水（shuǐ）浴鍋，溫度控製在37-40℃左右，有利於石（shí）蠟切片的展開，貼好的切片置於60℃恒溫箱內幹燥2小（xiǎo）時，蛋白質（zhì）凝固後即可染色。

8、切片（piàn）脫蠟及水化：幹燥後的切片（piàn）置於二甲苯中進行脫蠟，然後依次使用從高濃度到低濃度遞減的順序進行經純酒精、95%、85%、70%進行水化。

9、染色：

經（jīng）典的蘇木（mù）精和伊紅：細胞核被蘇木（mù）精染成紫藍色，多（duō）數細（xì）胞質及非細胞成分被伊紅染成粉紅色。實（shí）驗操作簡單。

免疫組化：指帶顯色劑標記的特異性抗體在（zài）組織細胞原（yuán）位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色（sè）反（fǎn）應。

冰凍切片

冰凍切片是一種（zhǒng）在低溫條件下使（shǐ）組織快速冷凍（dòng）到一定的硬度，然後進行切（qiē）片的一種方法。製作（zuò）過程較（jiào）石蠟（là）切片快捷、簡便，因而多應用（yòng）於手術中的快速病理診（zhěn）斷。

金屬質感分（fèn）割線

一、取材：

應盡可能快地采取（qǔ）新鮮的材料，防止組（zǔ）織發生死後變化。

二、速凍：

1、將組織塊平放於軟塑瓶蓋或特製小盒（hé）內（直徑約2cm）。

2、如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織，然後將特製小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內。

3、當盒底部接（jiē）觸液氮時即開始氣化沸騰，此時小盒保持原位切勿浸入液氮（dàn）中，大約10-20s組織即迅速（sù）冰結成塊。

4、在製成凍塊後，即可置入恒冷箱切片機冰凍切片。

5、若需要保存，應快速以（yǐ）鋁箔（bó）或塑（sù）料薄膜封包，立即（jí）置入-80℃冰箱貯存備用。

三、固定：

1、樣品托上塗一層（céng）OCT包埋膠，將（jiāng）速凍組織（zhī）置於（yú）其上（shàng），4℃冰箱預冷5-10min讓OCT膠浸透組織。

2、取下組織置（zhì）於錫箔或者玻片上，樣品托速凍。

3、組織置（zhì）於樣品托（tuō）上，其上再添一層OCT膠，以完全覆蓋為宜，速凍架（PE）上30min。

四，切片：

1、恒溫冰凍切片機為較理想的冰凍切片機，其基本結構（gòu）是將切片機置於低溫密閉（bì）室內，故切片時不受外界溫度和環境影響，可連續切薄片至5-10μm。

2、切片時，低溫室內溫度以-15℃ ~ -20℃為宜，溫（wēn）度過（guò）低組織易破碎，抗卷板的位置（zhì）及角度要適當，載玻片附貼組織切片，切勿上下移動。

五、免疫熒光染（rǎn）色：

1、冰凍切片室溫晾幹（gàn）15min，可用含10%正常山（shān）羊血（xuè）清的PBS室溫封閉（bì）切（qiē）片1小時（此步可（kě）不洗）。

2、滴加適當比例稀釋（shì）的一抗或一抗工作液（抗體的量視組織大小而定，原則是（shì）可以均勻覆蓋組織麵（miàn），且保證整個過程中不會使組織幹涸）。

3、將切片放在加了PBS的免疫組化濕盒，室溫孵育（yù）2小時或4℃過夜。

4、第二天先將濕盒放到37℃回（huí）溫1h，然（rán）後吸取片上的一抗進行回（huí）收，將切片插入到小染缸PBS衝洗。

5、滴加用PBS稀釋好的二（èr）抗（避光）置於分子雜交箱中37℃孵育1小（xiǎo）時（shí）。回收二抗，切片置於染缸（gāng）內，PBS洗5min×3次。

6、滴（dī）加DAPI工作液（yè）染核，室溫10-20min（工作濃度0.1%染色15min）。

7、回收DAPI，滴加5-10μl抗熒（yíng）光衰減封（fēng）片劑或中性樹膠，用處理幹淨的蓋玻片封片（piàn），即可到熒光顯微鏡或者共聚焦顯微（wēi）鏡下觀察拍照。

8、做好的切片放在切片盒內，置於4℃冰箱，可保存一周左右。

優缺點的不同（tóng）

石蠟切（qiē）片 冰凍切片

應用對象 廣（guǎng）泛應用常規製片 手術中的（de）快速病理診斷

保持時間 持久保存 保存時間較短

優點 1、 細胞定位（wèi）準確 1、簡便。

2、 組織細胞形態結構保存完好， 2、 快速，用時短

3、 保存時（shí）可放在室溫（wēn）下（xià）保存 3、 組（zǔ）織變化不大

4、 能很好的保存脂肪、類脂等成分

5、 較好（hǎo）的保存抗原活性及酶類。

缺點 1、步驟繁多，製片中抗原活性有所降低 1、不易（yì）做（zuò）連續切片（piàn）

2、切（qiē）取的組織不能過大

以上就是石蠟切片和冷凍切片的對比了！